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이전 연구에서 Streptomyces sp. M3 균주로부터 polyguluronate에 기질특이성을 가지는 알긴산분해효소를 cloning하고 활성을 연구하였다. 이번 연구에서는 pColdI vector에 들어있는 M3 알긴산분해효소 유전자를 돌연변이시켜 알긴산분해효소의 활성을 증진시키고자 하였으며, 점-돌연변이 또는 무작위-돌연변이 방법을 사용하여 돌연변이를 실시하였다. Ser25Arg, Phe99Leu, Asp142Asn, Val163Ala, Lys191Glu 및 Gly194Cys 등 6 종류의 돌연변이 단백질을 얻을 수 있었다. Phe99Leu 및 Lys191Glu 돌연변이 단백질은 알긴산을 분해하는 능력을 완전히 잃었으나 Gly194Cys 돌연변이 단백질의 활성은 원래 단백질에 비하여 10배 증가하였다. 또한 돌연변이된 M3알긴산분해효소 단백질의 3차 구조는 Swiss-Model 자동모델러를 이용하여 생성하였으며 다른 알긴산분해효소의 결정구조와 비교하였다. 194 번째 아미노산인 글리신은 알긴산의 C-말단 보존서열인 YFKAGXYXQ의 Gly193과 Tyr195 사이에 위치한다. 이 연구에서 돌연변이된 글리신과 페닐알라닌 잔기들은 활성자리로부터 많이 떨어져있음에도 불구하고 돌연변이에 의하여 알긴산 분해활성이 강하게 영향을 받는 것으로 나타났다.
목차
Introduction
Materials and Methods
Results and Discussion
Acknowledgement
References
초록
참고문헌 (27)
참고문헌 신청
1. [학술지(정기간행물)] - Arnold, K. / 2006 / The SWISS-MODEL workspace, A web-based environment for protein structure homology modelling / Bioinformatics 22 : 195 ~ 201
2. [학술지(정기간행물)] - Bradford, M. / 1976 / A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding / Anal. Biochem 72 : 248 ~ 254
3. [학술지(정기간행물)] - Choi, S. H. / 2009 / Comparative homology modeling-inspired protein engineering for improvement of catalytic activity of Mugil cephalus epoxide hydrolase / BIOTECHNOLOGY LETTERS 31 : 1617 ~ 1624
4. [학술지(정기간행물)] - Gacesa, P. / 1998 / Bacterial alginate biosynthesis-recent progress and future prospects / Microbiol 144 : 1133 ~ 1143
5. [학술지(정기간행물)] - Gimmestad, M. / 2009 / Characterization of three new Azotobacter vinelandii alginate lyases, one of which is involved in cyst germination / J. Bacteriol 191 : 4845 ~ 4853
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4. [학술지(정기간행물)] - Gacesa, P. / 1998 / Bacterial alginate biosynthesis-recent progress and future prospects / Microbiol 144 : 1133 ~ 1143
5. [학술지(정기간행물)] - Gimmestad, M. / 2009 / Characterization of three new Azotobacter vinelandii alginate lyases, one of which is involved in cyst germination / J. Bacteriol 191 : 4845 ~ 4853
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UCI(KEPA) : I410-ECN-0101-2013-470-001468758