본 연구는 발거 된 상악 정중과잉치에서 얻은 치수유래 줄기세포(human dental pulp stem cells from supernumerary tooth, sDPSCs)를 대상으로 분화능의 변화 특성을 규명하고자 하였다. 의과 병력이 없는 6세 남자아이 상악 좌측 중절치와 측절치 사이에 매복된 과잉치에서 채취된 치수유래 줄기세포를 대상으로 하였다. 세포들을 각 계대별로 미분화군과 분화군으로 나누어 유세포분석법, 세포 형태 촬영, Alizarin red 염색, 정량적 역전사 중합효소 연쇄반응, 그리고 Western blot 검사를 시행하였다. 과잉치 치수 유래 세포들은 표면 항체 표지자 검사에서 CD24, CD106, 그리고 Stro-1은 음성으로 나타났고, CD44, CD73, CD90, 그리고 CD146는 양성으로 나왔다. 세포의 모습은 10계대가 넘어가면서 방추형 모양의 섬유모세포와 유사한 양상을 보이며 일정한 방향성을 가졌다. Alizarin Red 염색결과 8계대까지 세포들이 9계대 이후의 세포들 보다 진하게 염색되었다. 각 계대별 ALP, Osteonectin, Ostecalcin, DMP-1, DSPP 유전자 발현은 미분화군과 분화군 간의 차이가 없었다. Western blot 결과 분화군에서 DMP-1과 DSPP의 발현이 보다 뚜렷하였다. 이상의 결과를 종합해 볼 때, 과잉치 치수유래 줄기세포는 중간엽줄기세포의 특성을 가지며, 7계대까지 표면 항체 표지자의 반응이 증가하다가 9계대에서 급격히 감소한 것으로 미루어 9계대 이후의 세포는 분화능이 감소된 것이라 판단된다. 향후 과잉치 치수유래 줄기세포를 이용한 연구는 6계대의 세포를 이용한다면 충분한 세포수의 확보와 분화능의 유지에 도움이 될 것으로 사료되었다.
This study was to evaluate the dentinogenic potential of the human dental pulp stem cells from supernumerary tooth (sDPSCs) during the extended culture passage. Supernumerary tooth was collected from a patient who was 6 year ? old and had not medical history at the Department of Pediatric Dentistry, under guidelines approved by the IRB of the Dankook Dental Hospital. Soon after extraction of tooth, the pulp tissues were obtained under sterile condition. Primary, the cells were cultured until 16 passages. In every passage, cells were collected and applied for differentiation to investigate the stem cell potentials of sDPSCs, we performed a flow cytometry and immunophenotyping, a photograph of the cell morphology, an alizarin red solution staining, a real-time polymerase chain reaction and a Western blot. During differentiation, cell morphology was changed into fibroblast-like, spindle-shaped, elongated, and ordered aligned. Several representative mesenchymal stem cell markers, such as CD44, CD73, CD90 and CD146 were strongly expressed on the undifferentiation-specific sDPSCs surfaces. The expression of these markers was decreased during the sDPSCs extended culture of sDPSCs. Reversely, CD25, CD105 and Stro-1 were net expressed on the surface of sDPSCs during the culture. The sDPSCs in early passages, passage numbers 1?8 were highly mineralized by performing the alizarin-red staining. However, over passage number 9, mineralization of cell was rapidly decreased. Differently with mineralization, expression of osteogenic and dentinogenic genes, such as ALP, Osteonectin, Osteocalcin, DMP-1 and DSPP were not much increased during the early passages of sDPSCs.
목차
국문초록 i감사의 글 iii목 차 iv표 목차 v그림 목차 viI. 서 론 1II. 연구 대상 및 방법 3III. 연구 성적 10IV. 총괄 및 고찰 25V. 결 론 32참고문헌 33영문 초록 37